中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2011, Vol. 29 ›› Issue (2): 3-93-98.
杜明占1,沈继龙2,吴强1,胡向阳1,储德勇2 *
DU Ming-zhan1,SHEN Ji-long2,WU Qiang1,HU Xiang-yang1,CHU De-yong2 *
摘要: 目的 观察芍药苷通过白细胞介素13(IL-13)信号转导通路调控3T3成纤维细胞的细胞激活、增殖和胶原产生。 方法 分别用不同浓度的芍药苷(200、 400、 600、 800和1 000 mg/L)或重组白介素13(rIL-13, 6.25、 12.5、 50、100和200 μg/L),在体外刺激经无血清培养基培养12 h的3T3细胞,同时设空白对照组。培养24 h后,用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测rIL-13和芍药苷对细胞增殖的影响,并根据其结果选择1个适宜的rIL-13刺激浓度。用该浓度rIL-13(100 μg/L)刺激无血清培养基培养12 h的3T3细胞12 h后,再分别加入不同浓度的芍药苷(200、 400、 600、 800和1 000 mg/L),继续培养24 h,同时设空白对照组。用CCK-8法检测细胞增殖情况,碱裂解法测定培养上清羟脯氨酸含量。蛋白质印迹(Western blotting)分析α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、 白介素13受体α1 (IL-13Rα1)和信号转导和转录激活因子6(STAT6)的表达情况。RT-PCR检测细胞Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、 Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)、 IL-13Rα1和STAT6的mRNA水平。 结果 芍药苷能浓度依赖性地抑制3T3细胞增殖(r=-0.980, P<0.01),且各浓度组间差异有统计学意义(F=198.599, P<0.01)。rIL-13能明显促进3T3细胞增殖(r=0.538, P<0.05)。芍药苷(200、 400、 600、 800和1 000 mg/L)能浓度依赖性地抑制rIL-13刺激的3T3细胞增殖(1.780±0.177、 1.636±0.073、 0.965±0.066、 0.623±0.037和0.337±0.022, r=-0.971, P<0.01),且各浓度组间差异有统计学意义(F=198.537, P<0.01)。芍药苷还能浓度依赖性地抑制rIL-13刺激的3T3细胞分泌羟脯氨酸(3.030±0.094、2.976±0.047、2.814±0.047、2.652±0.124和2.408±0.124,r=-0.916,P<0.01),且各浓度组间差异有统计学意义(F=13.642, P<0.01)。Western blotting分析结果显示,芍药苷能抑制rIL-13刺激的3T3细胞α-SMA、IL-13Rα1和STAT6蛋白的表达。RT-PCR结果显示,芍药苷能抑制rIL-13刺激的3T3细胞Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、IL-13Rα1和STAT6 mRNA的转录水平。 结论 芍药苷通过IL-13/STAT6信号转导通路抑制成纤维细胞增殖、激活和胶原的产生,可能是芍药苷抗日本血吸虫病肝纤维化的机制之一。