Em18重组抗原特异性抗体的制备及对循环抗原检测的初探

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2006, Vol. 24 ›› Issue (5): 2-332.

Em18重组抗原特异性抗体的制备及对循环抗原检测的初探

江莉1*;李雄2;李浩1;牛新玲2;冯正1

1中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所，世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心，上海 200025; 2 新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心，乌鲁木齐 830002* 现工作单位：上海市疾病预防控制中心，上海 200336

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2006-10-30 发布日期:2006-10-30

Preparation of Specific Antibodies Against Recombinant Em18Antigen and Detection of the Circulating Antigen

JIANG Li1;LI Xiong2;LI Hao1;NIU Xin-ling2;FENG Zheng1

1 National Institute of Parasitic Diseases，Chinese Center for Disease Control and Prevention，WHO Collaborating Center for Malaria，Schistosomiasis and Filariasis，Shanghai 200025，China；2 Xinjiang Center for Disease Con-trol and Prevention，Urumqi 830002，China；* Shanghai Municipal Center for Disease Control and Prevention， Shanghai，200336，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2006-10-30 Published:2006-10-30
Contact: JIANG Li

摘要/Abstract

摘要： 目的用Em18重组抗原ReEm18制备特异性抗体，建立双抗体夹心ELISA，检测患者血清中的循环抗原。方法 ReEm18经亲和纯化，免疫BALB/c小鼠和新西兰兔，分别制备单克隆抗体（单抗）和多克隆抗体（多抗）。用获得的单抗和多抗建立双抗体夹心ELISA，检测患者血清中Em18循环抗原。结果免疫兔血清抗ReEm18抗体效价达1 ∶ 204 800以上。经ReEm18和多房棘球蚴病（AE）患者血清及健康人血清阻断ELISA试验双重筛选融合细胞，共获得14株抑制率＞50%的特异性阳性细胞克隆。将特异性单抗和多抗自由组合进行双抗体夹心ELISA，结果以9号单抗与多抗的配对检测抗原为最优，检测ReEm18的灵敏度达3 ng/ml。用建立的双夹心ELISA方法检测血清，11份AE血清中6份为阳性。结论获得针对ReEm18的特异性单抗和多抗，建立了敏感的双抗体夹心ELISA方法，血清学初步检测结果表明AE血清中存在可检测的Em18循环抗原。

关键词: 多房棘球蚴病, Em18重组抗原, 抗体, 循环抗原, 夹心ELISA

Abstract: Objective To prepare specific antibodies against the recombinant Em18 antigen （ReEm18）， estab-lish a sandwich ELISA and detect the Em18 circulating antigen in patients^, sera. Methods Rabbits and BALB/c mice were immunized with the ReEm18 antigen， which was purified by affinity method for preparation of the specific poly-clonal and monoclonal antibodies. A sandwich ELISA was established by the specific antibodies. Results By immu-nizing with the ReEm18 antigen， high antibody level was reached with a serum dilution of 1 ∶ 204 800 and above in the immunized rabbits. After double selection by ELISA using the ReEm18 antigen and block ELISA using both AE-positive and negative control sera， 14 positive cell clones were obtained with an inhibition rate of more than 50%. Those mono- and poly-clonal antibodies were matched freely in sandwich ELISA tests for detecting the ReEm18 antigen. A combina-tion of monoclonal antibody No.9 and polyclonal antibody showed the best result. The sensitivity to detect ReEm18 anti-gen was at 3 ng/ml. Six of 11 AE sera were positive when tested with the sandwich ELISA system. Conclusion Highly specific polyclonal and monoclonal antibodies have been prepared， and a sensitive sandwich ELISA established. Preliminary result is suggested that a detectable level of Em18 circulating antigen is present in AE patients^, sera.

Key words: Alveolar echinococcosis, Em18 recombinant antigen, Antibody, Circulating antigen, Sandwich ELISA

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