伯氏疟原虫青蒿素抗性相关的消减cDNA文库构建

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2004, Vol. 22 ›› Issue (3): 4-143.

伯氏疟原虫青蒿素抗性相关的消减cDNA文库构建

贝祝春,王京燕

军事医学科学院微生物与流行病研究所,北京 100071

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2004-06-30 发布日期:2004-06-30

Construction of the Subtracted cDNA Libraries Related to Artemisinin-resistance of Plasmodium berghei

BEI Zhu-chun,WANG Jing-yan

Institute of Microbiology and Epidemiology,Academy of Military Medical Sciences,Beijing,100071,China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2004-06-30 Published:2004-06-30

摘要/Abstract

摘要： 　　目的　构建伯氏疟原虫青蒿素抗性相关的消减cDNA文库。　方法　提取伯氏疟原虫K173株(NS)与青蒿素抗性株(AR)的总RNA ,superSMART法合成双链cDNA,分别以NS为消减方(driver),AR为试验方(tester)及AR为driver,AS为tester进行双向抑制性消减PCR(SSHPCR)。富集的差异表达cDNA克隆到pMD18T载体构建消减文库。　结果　NSAR和ARNS消减文库分别获得395个和506个阳性克隆,从NSAR和ARNS文库中随机挑取108个克隆PCR鉴定,分别有100个和104个含插入片段,大小在0.25～2kb之间。　结论　成功构建了伯氏疟原虫青蒿素抗性相关的消减cDNA文库。

关键词: 伯氏疟原虫, 青蒿素, 抗药性, PCR, 基因文库

Abstract: 　Objective To construct the subtracted cDNA libraries related to artemisinin-resistance of Plasmodium berghei using suppression subtractive hybridization PCR(SSH PCR). Methods Total RNA was extracted from the artemisinin-sensitive(NS)and artemisinin-resistant(AR)strains of Plasmodium berghei K173. The cDNA synthesis followed the protocol of super SMART cDNA synthesis kit. Taking the NS as driver, AR as tester and reverse,two subtractions were performed by SSH PCR. Enriched different expressed cDNA was cloned into pMD18-T vector to construct subtractive libraries. Results The subtracted cDNA libraries of NS-AR and AR-NS contained 395 and 506 positive clones respectively. The PCR results of 108 clones picked randomly from each library showed 100 and 104 positive inserts contained in the plasmids respectively, and distributing in 250-2 000 bp. Conclusion The successful construction of the subtracted cDNA libraries related to artemisinin-resistance of P. berghei enable us to identify the different expressed genes involved in the resistance mechanism.

Key words: Plasmodium berghei, Artemisinin, Drug resistance, Polymerase Chain Reaction, Gene Libraries

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