日本血吸虫组织蛋白酶L1基因在大肠埃希菌中的表达

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2004, Vol. 22 ›› Issue (2): 3-79.

日本血吸虫组织蛋白酶L1基因在大肠埃希菌中的表达

易冰,李卓雅,何蔼,郑小英,郑斌,周豪杰,王轶,张瑞林,余南,詹希美

中山大学中山医学院寄生虫学教研室,广州510080

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2004-04-30 发布日期:2004-04-30
通讯作者: 詹希美

Expression of Proteinase Cathepsin L1 Gene of Schistosoma japonicum in Escherichia coli

YI Bing,LI Zhuo-ya,HE Ai,ZHENG Xiao-ying,ZHENG Bin,ZHOU Hao-jie,WANG Yi,ZHANG Rui-lin,YU Nan,ZHAN Xi-mei

Department of Parasitology,Zhong Shan Medical College,Sun Yat-Sen University,Guangzhou 510089,China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2004-04-30 Published:2004-04-30
Contact: ZHAN Xi-mei

摘要/Abstract

摘要： 目的　在原核表达体系大肠埃希菌中进行日本血吸虫组织蛋白酶L1(SjCL1)基因表达。　方法　通过PCR从质粒pcDNA3-SjCL1中扩增得到SjCL1基因 ,定向克隆至原核表达载体pGEX-4T -1中 ,构建重组质粒pGEX-SjCL1,将该重组质粒转化大肠埃希菌JM109,转化子经异丙基 -β-D-硫代半乳糖苷诱导表达 ,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)和蛋白质印迹法 (Westernblotting)分析SjCL1基因表达产物。　结果　获得长约 1kb的PCR片段 ,构建了pGEX-SjCL1质粒。SDS-PAGE和Westernblotting检测表达产物 ,相对分子质量为 62 0 0 0。　结论　SjCL1基因在大肠埃希菌中以融合形式得到表达。

关键词: 日本血吸虫, 组织蛋白酶类, 基因表达

Abstract: Objective To express the proteinase cathepsin L1 gene of Schistosoma japonicum (SjCL1) in Escherichia coli JM109 cells. Methods The SjCL1 gene was amplified from the recombinant plasmid pcDNA3-SjCL1 by PCR. The gene was cloned into a prokaryotic expression vector pGEX-4T-1 to construct a recombinant plasmid pGEX-SjCL1. The E.coli JM109 cells were transformed with the recombinant plasmid pGEX-SjCL1 and the transformants were induced by IPTG to express the recombinant protein, the target protein was then identified by SDS-PAGE and Western blotting. Results A 1 kb length PCR product was obtained and a recombinant plasmid pGEX-SjCL1was constructed. The expression product was detected by SDS-PAGE and Western blotting and an expression band about 62 000 was found. Conclusion The SjCL1 gene is effectively expressed in the E. coli JM109 cells.

Key words: Schistosoma japonicum, cathepsins, gene expression

易冰;李卓雅;何蔼;郑小英;郑斌;周豪杰;王轶;张瑞林;余南;詹希美. 日本血吸虫组织蛋白酶L1基因在大肠埃希菌中的表达[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2004, 22(2): 3-79.

YIBing;LIZhuo-ya;HEAi;ZHENGXiao-ying;ZHENGBin;ZHOUHao-jie;WANGYi;ZHANGRui-lin;YUNan;ZHANXi-mei. Expression of Proteinase Cathepsin L1 Gene of Schistosoma japonicum in Escherichia coli[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2004, 22(2): 3-79.

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