恶性疟原虫MSP1_(19)与PfCMR基因的体外重组与克隆鉴定

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 1999, Vol. 17 ›› Issue (1): 4-15.

恶性疟原虫MSP1_(19)与PfCMR基因的体外重组与克隆鉴定

李学荣;余新炳;罗树红

中山医科大学寄生虫学教研室,广州 510089

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:1999-02-28 发布日期:1999-02-28

RECOMBINATION AND CLONING OF MSP1 19 AND PfCMR OF PLASMODIUM FALCIPARUM

LI Xuerong;YU Xinbing;LUO Shuhong

Department of Parasitology;Sun Yat sen University of Medical Sciences;Guangzhou 510089

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:1999-02-28 Published:1999-02-28

摘要/Abstract

摘要： 　　目的：构建编码恶性疟原虫复合多价保护性抗原的基因的重组质粒，为进行基因免疫提供条件。方法：设计一对特异引物Ｐ１与Ｐ２，采用ＰＣＲ法扩增获取ＭＳＰ１中Ｃ端１９肽基因，纯化后用ＳａｌⅠ＋ＸｂａⅠ双酶切，把含复合基因ＰｆＣＭＲ的重组质粒ｐＷＲ４５０－１／ＰｆＣＭＲ用ＥｃｏＲⅠ＋ＳａｌⅠ双酶切，回收复合基因ＰｆＣＭＲ，将ＭＳＰ１１９基因与ＰｆＣＭＲ基因串联后与经ＥｃｏＲⅠ＋ＸｂａⅠ双酶切的真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３进行重组，转化大肠杆菌ＪＭ１０９，经电泳初筛、双酶切鉴定及ＰＣＲ鉴定。结果：ＰＣＲ扩增获得３６３ｂｐ的ＭＳＰ１１９基因，重组克隆经双酶切鉴定及ＰＣＲ鉴定后获得正确重组克隆子ｐｃＤＮＡ３－ＰｆＣＭＲ－ＭＳＰ１１９（命名为ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆ８），Ｐｆ８基因长度为６１８ｂｐ。结论：成功构建编码恶性疟原虫多价保护性抗原的基因的重组质粒ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆ８。

关键词: 恶性疟原虫, 聚合酶链式反应, 核酸疫苗, 克隆, 主要裂殖子表面蛋白1

Abstract: 　AIM∶ To construct a recombinant plasmid DNA encoding multiantigens of Plasmodium falciparum and to provide the requirements for DNA immunization. METHODS:Two oligonucleotide primers were designed to amplify MSP1 19 , the purified PCR products were digested by SalⅠ+XbaⅠ, and the recombinant plasmid pWR450 1/PfCMR was digested by EcoRⅠ+SalⅠ to recover PfCMR gene . PfCMR and MSP1 19 gene fragments were linked and recombined with mammalian expression vector pcDNA3. RESULTS:The MSP1 19 gene fragment with about 363 base pairs were specifically amplified by using PCR technique. The positive recombinant pcDNA3 PfCMR MSP1 19 (named pcDNA3 Pf8) was screened and identified by agarose gel electrophoresis,endonulease digestion and PCR technique, the whole length of Pf8 is 618 bp . CONCLUSION:By specifically amplifying MSP1 19 gene at the C terminal of MSP1,a recombinant plasmid pcDNA3 Pf8 encoding multiantigens of Plasmodium falciparum was successfully constructed.

Key words: Plasmodium falciparum, polymerase chain reaction, nucleic acid vaccine, cloning, merozoite surface protein 1

李学荣;余新炳;罗树红. 恶性疟原虫MSP1_(19)与PfCMR基因的体外重组与克隆鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 1999, 17(1): 4-15.

LIXuerong;YUXinbing;LUOShuhong . RECOMBINATION AND CLONING OF MSP1 19 AND PfCMR OF PLASMODIUM FALCIPARUM[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 1999, 17(1): 4-15.

[1]	姜文静, 孟雅莉, 赵利娜, 王春苗, 张晓磊. 刚地弓形虫棒状体蛋白18和膜表面抗原30复合核酸疫苗对小鼠的免疫保护作用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(5): 532-538.
[2]	周瑞敏, 纪鹏慧, 李素华, 杨成运, 刘颖, 钱丹, 邓艳, 鲁德领, 赵玉玲, 赵东阳, 张红卫. 河南省自赤道几内亚输入的恶性疟原虫抗药性基因多态性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(5): 593-600.
[3]	徐少杰, 陈绅波, 陈军虎. 恶性疟原虫重复散布家族基因转录调控的研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(3): 374-379.
[4]	邹伟浩, 吴蔚玲, 廖远鹏, 陈敏, 彭鸿娟. 刚地弓形虫抗缓殖子期抗原1单克隆抗体的制备与应用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(5): 587-593.
[5]	田斌, 廖瑜, 文岚, 肖芳, 张兵, 申晓君. 长沙市122例输入性恶性疟原虫多药抗性基因1拷贝数变异分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(1): 127-131.
[6]	石明丽, 肖波, 江陆斌. 恶性疟原虫var基因的表达调控机制研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(6): 719-724.
[7]	史善美, 陈军虎. 恶性疟原虫RIFIN蛋白的结构和功能研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(2): 249-255.
[8]	张苍林, 聂仁华, 徐丹, 吕高伟, 王剑, 杨亚明, 邓艳, 刘言, 周红宁. 中缅边境地区恶性疟原虫Pfcrt、Pfmdr和PfK13基因多态性与体外药物敏感性相关性的分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(5): 580-588.
[9]	叶升玉, 成依依, 李曼, 周红宁. 我国恶性疟原虫主要药物抗性研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(5): 631-636.
[10]	周水茂, 涂祖武, 杨燕, 陈芳, 贾西帅. 环介导等温扩增检测恶性疟原虫与其他疟原虫的效果评价[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(4): 423-428.
[11]	叶升玉, 成依依, 李曼, 周红宁. 恶性疟原虫抗药性分子标记检测方法研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(4): 490-495.
[12]	李仁清, 王小梅, 孙玉兰, 吕燕宁, 窦相峰, 王全意. 宏基因组学二代测序技术在输入性疟疾诊断中的应用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(6): 727-729.
[13]	李润花, 关丽, 殷国荣. 刚地弓形虫滑行相关蛋白45的克隆、表达与免疫反应性检测[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(5): 563-567.
[14]	杨瑞, 熊乙丁, 郭珊珊, 廖业, 夏嫱, 郭锦锦, 杜联峰. 前纤维蛋白多克隆抗体对刚地弓形虫在小鼠胚胎成纤维细胞中增殖的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(4): 437-443.
[15]	赵正虎, 钱胜南, 万静宜, 唐子茹, 沈双. 刚地弓形虫磷酸丙糖异构酶多克隆抗体的制备及鉴定分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(3): 311-316.