日本血吸虫虫卵cDNA文库的免疫筛选

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 1998, Vol. 16 ›› Issue (3): 176-180.

日本血吸虫虫卵cDNA文库的免疫筛选

周金春; 易新元; 曾庆仁; 张顺科; 蔡春

湖南医科大学寄生虫学教研室

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:1998-06-30 发布日期:1998-06-30

IMMUNOSCREENING OF SCHISTOSOMA JAPONICUM EGG cDNA LIBRARY

Zhou Jinchun; Yi Xinyuan; Zeng Qingren; Zhang Shunke; Cai Chun

Department of Parasitology; Hunan Medical University; Changsha 410078

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:1998-06-30 Published:1998-06-30

摘要/Abstract

摘要： 目的：从日本血吸虫虫卵文库中筛选并鉴定出与免疫诊断及免疫预防有关的基因克隆。方法：采用Ｓ．ｊＳＥＡ超免疫兔血清对日本血吸虫卵文库进行筛选。先去除抗大肠杆菌抗体，经三轮筛选得到１２个阳性克隆，然后，用辅助噬菌体进行体内剪切，经抗菌素平板筛选含重组质粒的阳性菌落，每个菌落分为２份，一份进行ＰＣＲ扩增以测定插入片段的大小。另一份用于制备纯质粒ＤＮＡ模板，进行ＤＮＡ序列测定，通过ＧＣＧ软件对所得ＤＮＡ序列与ＧｅｎＢａｎｋ中的序列进行同源性比较。结果：共筛得１２个阳性克隆，ＰＣＲ后测得其长度大多为１．２ｋｂ，其中８个与Ｓ．ｊ热休克蛋白７０的基因同源，２个与Ｓ．ｊ钙网蛋白同源，１个与Ｓ．ｍｉｍｍｕｎｏｐｈｉｌｉｎ同源，１个与Ｓ．ｊ２３ｋＤａ蛋白同源。结论：本研究首次报道用抗ＳＥＡ血清对日本血吸虫虫卵文库的筛选结果，所得的１２个阳性克隆均为编码日本血吸虫免疫诊断及预防有关的基因。

关键词: 日本血吸虫, 虫卵, cDNA文库, 免疫筛选

Abstract: AIM: To screen and identify genes encoding vaccine candidates and molecules with diagnostic potential from S.japonicum(S.j) egg cDNA library. METHODS: S.j egg cDNA library was screened by sera from SEA immunized rabbits. Positive clones were identified after three rounds of screening and were excised automatically in vivo with helper phage. Products of PCR were used to detect insert sizes by agarose gel electrophoresis. DNA samples were obtained by purification using mini prep kit Automatic sequencing was carried out and the sequence data were analysed using GCG softw are. RESULTS: Twelve clones were identified as positive and the inserts were around 1. 2 kb in size. Compared with DNA sequences in GenBank, eight clones were homologous to a 70 kDa S. j heatshock protein (S. j H sP70). C18 exhibited 97. 8% homology with S. j 23. C22 and C23 shared 82. 4% and 89. 5% homology with S. j calreticulin, respectively. C12w as homologous to S. mansoni (S. m. ) immunophilin. CONCLUSION: This paper first reported the results of
immuno screening S. j egg cDNA library by anti-SEA sera. Twelve positive clones were found to be related to protective immunity and/or immunodiagnosis of schistosomiasis.

Key words: Schistosoma japonicum, egg, cDNA library, immunoscreening

周金春;易新元;曾庆仁;张顺科;蔡春. 日本血吸虫虫卵cDNA文库的免疫筛选[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 1998, 16(3): 176-180.

ZhouJinchun;YiXinyuan;ZengQingren;ZhangShunke;CaiChun. IMMUNOSCREENING OF SCHISTOSOMA JAPONICUM EGG cDNA LIBRARY[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 1998, 16(3): 176-180.

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