中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2019, Vol. 37 ›› Issue (5): 525-531.doi: 10.12140/j.issn.1000-7423.2019.05.004
Yun-ting DU1,*(), Wei ZHAO2, Lan XU1, Xue-xing ZHANG3
摘要:
目的 探讨青蒿琥酯(ART)和重组人促红细胞生成素(rhEPO)联合使用对小鼠脑型疟疾相关因子表达的影响及其免疫机制。方法 40只雌性C57BL/6小鼠随机分为5组,每组8只,其中4组小鼠通过腹膜内注射伯氏疟原虫ANKA虫株感染的红细胞(PbA)1 × 106个。感染后第2~4天,感染对照组小鼠不作处理;ART治疗组小鼠连续3 d灌胃ART 200 μl/鼠,剂量为40 mg/(kg·d);rhEPO治疗组小鼠连续3 d尾静脉注射rhEPO 50 U/鼠;ART+rhEPO联合治疗组小鼠连续3 d灌胃ART 200 μl/鼠,剂量为40 mg/(kg·d),并尾静脉注射rhEPO 50 U/鼠;空白对照组小鼠注射等量PBS。于感染后第4天每隔1天采用吉氏染色的薄(尾)血涂片观察原虫血症,每天监测死亡情况。于感染后第5天采集各组小鼠眼球血,ELISA检测血清中促炎/抗炎因子γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素10(IL-10)的表达水平。脱颈处死各组4只小鼠,取脑组织,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测小鼠脑组织中核转录因子κB(NF-κB)、颗粒酶B(granzyme B)、IFN-γ、细胞间黏附分子1(VCAM-1)和血管细胞间黏附分子1(ICAM-1)的mRNA相对转录水平,流式细胞术检测小鼠脑组织中CD4+ T细胞和CD8+ T细胞的百分比。结果 感染对照组小鼠在第6天开始出现死亡,至第12天全部死亡;rhEPO治疗组、ART治疗组分别于第8、10天开始出现死亡,至第26天全部死亡;ART+rhEPO联合治疗组小鼠死亡发生于第12天,至第26天死亡率为50%。血涂片观察原虫血症结果显示,感染后第6~12天,ART+rhEPO联合治疗组的原虫血症从3.14%升至7.10%,但均低于感染对照组(4.98%~19.90%)和rhEPO治疗组(4.96%~15.50%)。ELISA结果显示,ART+rhEPO联合治疗组小鼠血清中的促炎因子IFN-γ和TNF-α水平分别为(378.94 ± 145.18)和(109.89 ± 27.05)pg/ml,低于感染对照组的(726.09 ± 35.40)和(345.97 ± 42.70)pg/ml(P < 0.05或P < 0.01),IFN-γ水平亦低于ART治疗组的(795.45 ± 64.48)pg/ml(P < 0.01);抗炎因子IL-10为(224.18 ± 22.93)pg/ml,高于感染对照组的(90.72 ± 6.30)pg/ml(P < 0.01)和ART治疗组的(103.99 ± 18.04)pg/ml(P < 0.01)。qRT-PCR检测结果显示,ART+rhEPO联合治疗组小鼠脑组织中NF-κB、granzyme B、VCAM-1、ICAM-1和IFN-γ的mRNA相对转录水平为0.89 ± 0.59、17.23 ± 4.39、1.63 ± 0.21、1.48 ± 0.16、11.68 ± 2.63,均低于感染对照组的3.62 ± 0.36、88.54 ± 21.13、2.65 ± 0.50、3.13 ± 0.62、60.56 ± 4.19(P < 0.05或P < 0.01);其中NF-κB、granzyme B、ICAM-1和IFN-γ的mRNA相对转录水平亦低于rhEPO治疗组的2.00 ± 0.59,58.55 ± 1.11、2.68 ± 0.29、44.69 ± 1.17(P < 0.05或P < 0.01)。流式细胞术检测结果显示,ART+rhEPO联合治疗组小鼠脑部浸润的CD4+ T细胞和CD8+ T细胞百分比分别为(1.29 ± 0.06)%和(1.68 ± 0.28)%,低于感染对照组的(2.77 ± 0.26)%和(5.30 ± 0.35)%、ART治疗组的(2.04 ± 0.66)%和(3.65 ± 0.14)%(P < 0.01)。结论 ART联合rhEPO治疗可以显著减轻小鼠脑型疟疾相关因子的表达,其机制与其平衡脑部促炎/抗炎因子的表达,以及抑制CD4+ T和CD8+ T细胞在脑部的浸润密切相关。
中图分类号: